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人肝癌氟尿嘧啶耐药株细胞复苏操作详细步骤
发布时间:2018-01-19 点击次数:814次
   人肝癌氟尿嘧啶耐药株属于贴壁型细胞,如果漂浮的死细胞多,说明细胞有很多老化的,建议每次传代的时候,在用胰酶消化之前,zui好用PBS将细胞漂洗一遍,胰酶消化的时间要把握好,37℃2-3min即可,及时终止反应,否则胰酶消化过度对细胞损伤较大,也会有很多死细胞出现的;吹打细胞的动作要轻柔。
  
  待细胞生长状态良好时,可进行人肝癌氟尿嘧啶耐药株细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液,加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
  
  人肝癌氟尿嘧啶耐药株细胞复苏操作步骤:
  
  1.将冷冻管迅速由液氮转入到37℃水浴中,冷冻管的顶部保持在水面以上以避免任何污染,不定时搅拌加速解冻;
  
  2.当细胞完全解冻后,用含70%乙醇的纱布擦拭冷冻管消毒;
  
  3.将解冻后细胞转移到含4℃预平衡培养液的试管中;
  
  4.细胞悬液在4℃下200磄离心10分钟;
  
  5.弃上清,将细胞重新悬浮在新鲜培养液中;
  
  6.将细胞转移到细胞培养瓶,CO2孵箱中培养;
  
  7.是用倒置显微镜检查细胞存活率以及细胞密度,如果细胞密度过高,用培养液稀释至适宜浓度。

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