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荧光定量PCR分析常见术语说明
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  实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)指的是在PCR进行的同时,对其过程进行监测的能力(即实时)。因此,数据可在PCR扩增过程中,而非PCR结束之后,进行收集。这为基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了革命性的变革。在荧光定量PCR(qPCR)中,反应以循环中首次检测到目标扩增的时间点为特征,而非在一定循环数后目标分子累计的扩增量。目标核酸的起始拷贝数越高,则会越快观察到荧光的显著增加。相反,终点法检测(也称“读板检测”)测量的是PCR循环结束时累计的PCR产物量。
  
  荧光定量PCR将PCR扩增和检测合并为单一步骤。这样就无需使用凝胶电泳进行产物检测,更重要的是这一方法是真正定量的。在荧光定量PCR中,荧光染料被用来在热循环中标记PCR产物。荧光定量PCR仪器在反应的对数期测定荧光信号的积累,获得快速精确的PCR产物定量以及客观的数据分析。
  
  荧光定量PCR分析常见术语:
  
  扩增子:PCR过程而产生的DNA短片段
  
  扩增曲线:根据荧光信号相对于循环数而制作的曲线
  
  基线:PCR起始时,荧光信号还未发生变化的几个循环
  
  Ct(阈值循环):荧光信号超过NTC(无模板对照样品)固定阈值时的循环数。用于对扩增质量进行验证。
  
  核酸目标:(也称为“目标模板”)——需要扩增的DNA或RNA序列
  
  惰性参比染料:一种可作为内部对照,以用于在数据分析时对报告基团染料信号进行均一化的染料。均一化是对因浓度或体积变化而随之引起波动进行的必要校正。所有的SDSPCR试剂盒都提供了参比荧光对照。
  
  Rn(均一化报告基团):报告基团染料释放的荧光强度除以惰性参比染料释放的荧光强度
  
  Rn+:一次反应的Rn值包含所有的组分,包括模板
  
  Rn-:未反应样品的Rn值。Rn值可通过以下方式获取:
  
  实时荧光定量PCR(qPCR)运行的早期循环(产生可被检测的荧光信号之前的循环),或不含有任何模板的反应。
  
  ΔRn(deltaRn):在特定PCR条件设置下所产生的信号量级。
  
  ΔRn可通过以下公式计算:(Rn+)–(Rn-)标准品具有已知浓度的A样本,用于绘制标准曲线。通过使用不同浓度的标准品,您可构建用于未知样品定量分析的标准曲线。
  
  阈值:早期PCR循环时Rn值的平均标准差,乘以相应的校正系数阈值应当设定在PCR指数扩增时的相关区域。
  
  未知:具有未知模板量的样品。即,您需要进行检测的样品。

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